Dados do Trabalho

Título

VALIDAÇAO DA EXTRAÇAO DE DNA DE AMOSTRAS DE REFERENCIA DE SANGUE HUMANO UTILIZANDO A RESINA CHELEX® 100

Introdução

O processo de extração de DNA é uma etapa crucial para o exame de identificação genética, sendo a extração pela resina Chelex® 100 uma metodologia simples e de baixo custo para uso em amostras de referência (WALSH, 2023).

A validação interna é um processo que busca demonstrar que a técnica adotada é robusta e confiável para aplicação no laboratório (SWGDAM, 2016), sendo necessária para os novos métodos a serem usados na rotina do SEPGEF.

Objetivos

O trabalho busca realizar a validação da extração de DNA de amostras de referência de sangue humano por meio da resina Chelex no SEPGEF.

Parte experimental

Extração de DNA por Chelex de suabes com sangue de 6 voluntários, quantificação, sequenciamento e análise de dados, seguindo os protocolos do SEPGEF. O projeto foi aprovado pelo Comitê de Ética em Pesquisa (CAAE 61749922.8.0000.5553).

Resultados e Discussões

A partir da extração de DNA por Chelex de 3 suabes de cada um dos 6 voluntários, foram obtidas as concentrações de DNA. A média obtida pela quantificação de DNA dos doze suabes analisados foi de 0,43 ± 0,21 ng/µL.

A extração de DNA de amostras de referência de sangue humano utilizando a resina Chelex® 100 foi capaz de extrair DNA autossômico humano, de modo a gerar perfis genéticos em quantidade e qualidade nas etapas subsequentes, sem a necessidade de quantificação do DNA na amostra de sangue ao se utilizar o volume de 2,3 µL da solução obtida após a extração por Chelex (disponibilizando aproximadamente 1 ng de DNA para a etapa de amplificação), tornando a referida metodologia validada no SEPGEF.

Conclusões

Com base na validação interna realizada, demonstramos que a extração de DNA em suabe com sangue de referência por Chelex® 100 pode ser realizada com eficiência no SEPGEF.

Referências e agradecimentos

WALSH, P. S.; METZGER, D. A.; HIGUCHI, R. Chelex 100 as a Medium for Simple Extraction of DNA for PCR-Based Typing from Forensic Material. BioTechniques, v. 54, n. 3, p. 134–139, mar. 2013.

SWGDAM. Validation Guidelines for DNA Analysis Methods. 2016.

Palavras Chave

Extração, Chelex, Validação.

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